设计引物要先对模板DNA测序吗?不测序的话又如何知道能设计出碱基互补的引物呢?设计引物是否就是对引物长度的设计?(因为模板是已经存在的,引物只能根据模板序列设计)

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/12 16:43:31
设计引物要先对模板DNA测序吗?不测序的话又如何知道能设计出碱基互补的引物呢?设计引物是否就是对引物长度的设计?(因为模板是已经存在的,引物只能根据模板序列设计)

设计引物要先对模板DNA测序吗?不测序的话又如何知道能设计出碱基互补的引物呢?设计引物是否就是对引物长度的设计?(因为模板是已经存在的,引物只能根据模板序列设计)
设计引物要先对模板DNA测序吗?不测序的话又如何知道能设计出碱基互补的引物呢?
设计引物是否就是对引物长度的设计?(因为模板是已经存在的,引物只能根据模板序列设计)

设计引物要先对模板DNA测序吗?不测序的话又如何知道能设计出碱基互补的引物呢?设计引物是否就是对引物长度的设计?(因为模板是已经存在的,引物只能根据模板序列设计)
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度.理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增.
但在设计引物时还应该遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右.
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段.
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带.ATGC最好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列.
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带.
⑤引物3’端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败.
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处.
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性.

设计引物要先对模板DNA测序吗?不测序的话又如何知道能设计出碱基互补的引物呢?设计引物是否就是对引物长度的设计?(因为模板是已经存在的,引物只能根据模板序列设计) 不知序列的DNA模板PCR引物的设计引物不是要根据模板设计吗,可模板不知道序列,也许已知一段序列去不符合引物设计的要求 怎么办呢如果在模板上加一个修饰片断,然后根据修饰的片断设计引 用基因组DNA做模板进行PCR扩增,设计引物所选序列也用cDNA为模板有什么不同是用这两个模板做pcr,在设计引物时,设计引物所用的序列有区别么 用mRNA做模板PCR的问题?用双链DNA扩增的原理比较好理解,而用单链的RNA扩增怎么设计引物呢?产物是双链DNA吗 PCR引物设计问题如果我设计的引物,扩增出来的目的片段长度为200BP,但是石蜡包埋组织提取出来的DNA模板大多数在100-120BP长度,那该如何.模板比理论上要扩出来的目的片段长度还短,怎么解决 pcr 如果把全部模板DNA扩增出来,引物怎么设计 新手:如何给k-ras基因设计引物要进行癌症的检测,一般检测k-ras基因,求设计该引物的思路先从癌症患者血中提取DNA进行测序,对照正常基因,确定突变位点,再设计,为什么都是检测k-ras基因,但看 请问在PCR实验中,如果不知道模板DNA的核酸序列的情况下如何设计PCR引物?最近一直在学PCR. 引物设计问题,以mRNA序列设计引物,然后用cDNA为模板来扩增,在设计引物时mRNA序列是否要反转序列?我想的是,不反转的话设计的引物是和mRNA互补的,而mRNA合cDNA,这样的话设计的引物就不和cDNA互 急!请问根据小麦小G蛋白的cDNA基因设计引物,用小麦总DNA作为模板,用PCR能扩增出小麦小G蛋白的基因片...急!请问根据小麦小G蛋白的cDNA基因设计引物,用小麦总DNA作为模板,用PCR能扩增出小麦小G 在设计DNA的引物时,靶基因应该选DNA的模板链(反义链)还是编码连(正义链)?有什么区别吗?那如果是设计RNA的引物,例如单股正链RNA,用哪条链作为靶基因?引物是根据应该根据它自身的序列 如果要使用PCR扩增一段已知的DNA序列,要如何设计引物 PCR设计的引物为什么是DNA而不是RNA PCR中DNA聚合酶使引物间连成一条与模板DNA互补的DNA吗? 请教长片段DNA如何设计测序引物? 运用dsRNA基因沉默的引物设计问题我想使用T7 RiboMAX Exp ress RNAi System试剂盒,体外转录出用于RNA干扰的dsRNA.之前以cDNA为模板,设计插入T7启动子的引物,合成DNA模版.想问,这个插入T7启动子引物设计 关于基因组克隆的问题问下哦,以DNA为模板,设计两端引物(引物包含起始密码子和终止密码子).扩出来的片段,与以CDNA模板扩出来的一样.是不是就可以说这个基因没有内含子啊?我说的是以DNA ncbi上的基因序列是编码链还是模板链呢?如果通过基因名选择,出来是一个反向的序列,对引物设计有无影响?